APLICAÇÃO DE BIOTECNOLOGIA NA PRODUÇÃO DE PADRÕES DE REFERÊNCIA DE METABÓLITOS DE CLONAZEPAM

Resumo

Introdução e objetivos: O clonazepam é um agente antiepiléptico bastante útil na terapêutica. Oprincipal metabólito descrito é um produto de redução do grupamento nitro. Métodos paradeterminação do clonazepam e seus metabólitos no plasma apresentam várias aplicações clínicas,toxicológicas e forenses e requer padrões de referência. Baseando-se no uso de enzimas fúngicas,o modelo microbiano do metabolismo animal pode ser uma alternativa para obtenção demiligramas de metabólitos com menor custo e maior eficiência se comparado aos modelosanimais. O objetivo deste trabalho foi produzir metabólitos do clonazepam para depois utilizá-loscomo padrão de referência. Metodologia: Uma solução em acetona de clonazepam 50 mg⋅mL-1 foiincubada, em meio líquido PDSM em shaker a 27±2 °C e 200 rpm, por 144 horas, com fungosfilamentosos (Beauveria Bassiana ATCC 7159, Cunninghamella elegans ATCC 9244, Chaetomiumindicum LCP 984200) cultivados por 65 horas. Os derivados produzidos foram monitorados porcromatografia em camada delgada (CCD), purificados por coluna cromatográfica (CC) eidentificados por GC-MS. Resultados e discussões: Todas as cepas utilizadas foram capazes debiotransformar clonazepam. Após a purificação 03 metabólitos foram isolados, sendo um delesidentificado como o metabólito encontrado em humanos: 7-acetamido-clonazepam. Conclusões:Os resultados demonstram o grande potencial da metodologia para a preparação de compostosde referência de metabólitos do clonazepam.